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牧醫所首次成功構建豬細小病毒的感染性克隆

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  近日,中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所寵物疫病防控科技創新團隊利用反向遺傳技術,在國際上首次成功構建了貓細小病毒和豬細小病毒的感染性克隆,建立了一種快速構建豬細小病毒全長感染性克隆的方法。該研究為今后細小病毒疫苗的研發提供了良好的載體平臺,也為其它細小病毒成員全基因組的構建提供了思路,開拓了一條新途徑。相關研究成果在線發表在《病毒學文獻(Archives of Virology》上。

  近年來,豬細小病毒感染呈擴大上升趨勢,給全球養豬業造成了巨大的經濟損失。豬細小病毒是引起豬繁殖障礙的主要病原之一,感染的主要對象是孕豬,特別是懷孕前的初產母豬,能夠引起懷孕母豬流產、產死胎、胎兒木乃伊化等,而母體通常缺乏臨診癥狀。

  該團隊首先利用人工基因合成的方法將豬細小病毒 (BQ分離株) 構建到改造后的pBlueScript II SK(+) 載體上,再利用PCR擴增豬細小病毒基因組的中間編碼區序列,并進行同義突變,形成限制性內切酶切位點,最后通過無縫克隆技術,構建成豬細小病毒質粒,利用特異性引物和限制性內切酶對篩選的克隆質粒進行分析和驗證,將驗證正確的質粒轉染進PK-15細胞中,進行感染性克隆病毒的拯救,最終成功拯救出包含豬細小病毒全基因組 (攜帶遺傳標記限制性內切酶) 的感染性克隆病毒。(通訊員 高冰清)

  原文鏈接:https://doi.org/10.1007/s00705-019-04209-w

 

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